DNA测序(DNA sequencing,或译DNA定序)是指利用一定的实验室方法分析特定DNA片段的碱基序列,也就是腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)与鸟嘌呤的(G)排列方式。快速的DNA测序方法的出现极大地推动了生物学和医学的研究和发现。
DNA测序有助于了解人类基因组、其他动物、植物和微生物的完整DNA序列,为进一步研究和改造目的基因提供了科学基础,极大地推动了生物学和医学的研究及发现,近几年来已经被快速应用在众多领域,如疾病诊断、微生物鉴定、法医生物学、生物技术、生物系统学等。
生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸,每组寡核苷酸都有固定的起点,但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。 由于DNA上的每一个碱基出现在可变终止端的机会均等,因此上述每一组产物都是一些寡核苷酸混合物,这些寡核苷酸的长度由某一种特定碱基在原DNA全片段上的位置所决定。 在可以区分长度仅差一个核苷酸的不同DNA分子的条件下,对各组寡核苷酸进行电泳分析,只要把几组寡核苷酸加样于测序凝胶中若干个相邻的泳道上,即可从凝胶的放射自影片上直接读出DNA上的核苷酸顺序。
由于二级结构或者其它内在因素的影响,复杂结构对于测序是巨大的挑战。常规的测序方案往往容易出现提前中断或者测序结果紊乱的现象。
以下几种序列特点的样品适合针对复杂结构的测序方案:
高GC含量:GC含量>60%的模板,或者局部高GC含量的模板
发夹结构:包含两个反向重复序列,两个重复序列之间间隔至少3个碱基
重复序列:2个或3个碱基的多个连续重复。
DNA发卡结构及RNAi 模板测序
RNA干扰(RNAi)是指双链RNA(dsRNA)介导的特异性抑制某相关基因表达的一种机制。它逐渐发展为一种研究基因功能的快速有效的新兴技术。
RNAi模板,由于其存在 “发卡结构”,给测序工作带来了很大挑战。在RNAi研究中采用的小发卡RNA(shRNA)通常无法测序成功,测序结果往往提前中断或者信号紊乱。三羊开肽拥有专门针对shRNA模板的测序方案,测序结果得到客户的一致认可。
三羊开肽的测序方案可以对环状基因组的噬菌体(噬菌体上清或者噬菌斑)直接测序。当难以获得足够量的测序用噬菌体DNA样品时,该操作为您省掉DNA制备的繁琐过程,并能获得高质量的测序结果。
本项服务包括:
·节约时间和成本-无需菌液培养和DNA制备
·ABI3730xl DNA序列分析仪进行序列分析
·Phred20有效长度大于600bp
·免费提供三羊开肽通用引物
·您可以选择在线提交订单,三羊开肽CLIMS系统将长期保存您的订单信息以及测序结果:
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三羊开肽可以通过Primer Walking测序,帮助您获得未知克隆的序列信息,或者验证克隆序列的准确性。如果您提供参考序列,我们可以一次完成长片段克隆的全长测序。
·引物设计并合成
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·序列拼接
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