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酵母蛋白表达
酵母是单细胞低等真核生物，既具有原核生物细胞生长速度快、容易培养、操作简单等优点，又具有真核生物对蛋白质的加工和修饰等功能。作为被研究的最多的真核生物，很早就被应用于异源蛋白的表达。与原核表达系统比较，酵母由于存在真核生物的蛋白修饰系统，易于表达出活性良好的蛋白；与其它真核表达系统如昆虫、动植物细胞等相比其具有快速、简便、成本低等优势。用作蛋白表达宿主酵母菌主要有酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 、多形汉逊酵母( Hansenula polymorpha) 、毕赤酵母(Pichia pastoris) 以及耶罗维亚酵母( Yarrowia lipolytica)等，其中以酿酒酵母和毕赤酵母的研究和应用最为广泛。
酵母蛋白表达
重组蛋白表达与纯化技术服务（P. Pichia表达系统）
重组蛋白有很多的应用，包括抗原制备、蛋白相互作用、酶学分析、以及药物靶点研究。选择合适的蛋白表达系统，对下游蛋白的应用有重要影响。蛋白功能、产率、成本是优先考虑的几个因素。
三羊开肽生物科技有限公司建立了严格的产品质量体系及一整套完善的客户服务流程、保密制度，以确保为客户提供优质的产品和成熟的服务。
技术服务按步骤收费，您可以选择从以下任意一步开始提供服务或仅选择其中的单独一步，详细价格请联系我们。
•酵母表达系统——步骤1. 目标基因亚克隆至酵母表达载体：
扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
测序验证构建质粒的准确性。
可提供表达载体：pPICZα和pPIC9K
提供客户：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
服务周期：1周
•酵母表达系统——步骤2. P. Pichia表达菌株电转化：
酶切线性化表达质粒。
将表达质粒通过电转化到高效的P. Pichia表达菌株中。
利用蛋白酶去除不需要的纯化标签（Tag），再纯化获得所需的目标蛋白（可选，构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点）。
通过PCR鉴定至少挑选5个阳性克隆。
可提供表达菌株：X33，GS115，KM71和SMD1168。
提供客户：PCR阳性克隆及PCR结果报告。
时间：1周
• 酵母表达系统——步骤3. P. Pichia表达菌株筛选：
将5个阳性克隆于BMGY培养基中扩增，然后换至BMMY培养基中，并加入甲醇诱导表达目标蛋白。
SDS-PAGE电泳检测培养上清中目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
如果培养上清中检测不到表达，则通过将上清浓缩20倍作用再检测，或通过Western-blot方法检测目标蛋白表达（客户需要提供相关抗体）。
提供客户：任意一个客户需要的阳性克隆菌株及表达筛选结果报告。
时间：2周
•酵母表达系统——步骤4. P. Pichia表达菌株表达优化：
挑选20个阳性克隆进行常规表达筛选，并对其中表达最好菌株优化表达条件。
对挑选出来的单克隆菌株，优化培养及诱导条件（培养基，菌体密度，甲醇浓度，诱导时间等），提高目标蛋白的表达量。
提供客户：任意三个客户需要的阳性克隆菌株及优化表达条件结果报告。
时间：2周
•酵母表达系统——步骤5.目标蛋白表达及纯化：
摇瓶培养1L重组酵母菌，诱导表达目标蛋白。
通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
提供客户：纯化好的目标蛋白1~10mg及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白，纯度最高可达90%以上。
时间：2~3周
•酵母表达系统——步骤6.目标蛋白的再加工及详细检测
对生物学活性要求较高的纯化后蛋白产品进行复性研究。
内毒素去除，除菌，冻干等进一步加工。
通过HPLC，质谱等方法详细检测目标蛋白的质量。
服务内容：
1.复性研究：
利用多达18种不同复性缓冲液的体系，对目标蛋白进行小量复性试验提供复性后样品供客户检测。
可根据客户要求，按照其中一种样品的复性条件制备小量的复性蛋白。
可提供具体的复性缓冲液配方及复性工艺。
2.除内毒素
3.过滤除菌
4.冻干
5.HPLC检测
6.质谱检测
提供客户：加工后的终产品及相关实验和检测报告。
时间：1~2周
•酵母表达系统——步骤7. 大规模制备
提供客户：合格的目标蛋白及服务报告。
时间：协商
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